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細胞培養經驗談
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細胞培養經驗談

1、如何選用培養基
  培養養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之,首選MEM做粘附細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養,各種目的無血清培養的首選是AIM V培養基(SFM)。在開始進行新的細胞培養時,可以參考下表所列的條件: 
細胞系 細胞類型 種 組織 推薦使用的培養基 
293 成纖維細胞 人 胚胎腎 MEM, 10% 熱滅活馬血清 
3T6 成纖維細胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% 胎牛血清 
A549 上皮細胞 人 肺癌 F-12K, 10%胎牛血清 
A9 成纖維細胞 小鼠 結締組織 DMEM, 10%胎牛血清 
AtT-20 上皮細胞 小鼠 垂體腫瘤 F-10, 15% 馬血清和2.5% 胎牛血清 
BALB/3T3 成纖維細胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% 胎牛血清 
BHK-21 成纖維細胞 倉鼠 腎 GMEM, 10% 胎牛血清 或MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
BHL-100 上皮細胞 人 乳房 McCoy'5A, 10% 胎牛血清 
BT 成纖維細胞 牛 鼻甲骨細胞 MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA 
Caco-2 上皮細胞 人 結腸腺癌 MEM, 20% 胎牛血清 和NEAA 
Chang 上皮細胞 人 肝臟 BME, 10% 小牛血清 
CHO-K1 上皮細胞 倉鼠 卵巢 F-12, 10% 胎牛血清 
Clone 9 上皮細胞 大鼠 肝臟 F-12K, 10% 胎牛血清 
Clone M-3 上皮細胞 小鼠 黑素瘤 F-10, 15% 馬血清和 2.5% 胎牛血清 
COS-1 成纖維細胞 猴 腎 DMEM, 10% 胎牛血清 
COS-3 成纖維細胞 猴 腎 DMEM, 10% 胎牛血清 
COS-7 成纖維細胞 猴 腎 DMEM, 10% 胎牛血清 
CRFK 上皮細胞 貓 腎 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
CV-1 成纖維細胞 猴 腎 MEM, 10% 胎牛血清 
D-17 上皮細胞 狗 骨肉瘤 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
Daudi 成淋巴細胞 人 淋巴瘤病人血液 RPMI-1640, 10% 胎牛血清 
GH1 上皮細胞 大鼠 垂體腫瘤 F-10, 15% 馬血清和 2.5% 胎牛血清 
GH3 上皮細胞 大鼠 垂體腫瘤 F-10, 15% 馬血清和2.5% 胎牛血清 
H9 成淋巴細胞 人 T細胞淋巴瘤 RPMI-1640, 20% 胎牛血清 
HaK 上皮細胞 倉鼠 腎 BME, 10% 小牛血清 
HCT-15 上皮細胞 人 結腸直腸腺癌 RPMI-1640, 10% 胎牛血清 
HeLa 上皮細胞 人 子宮頸癌 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA (in suspension, S-MEM) 
HEp-2 上皮細胞 人 喉 癌 MEM, 10% 胎牛血清 
HL-60 成淋巴細胞 人 早幼粒細胞白血病 RPMI-1640, 20% 胎牛血清 
HT-1080 上皮細胞 人 纖維肉瘤 MEM, 10% HI 胎牛血清 和NEAA 
HT-29 上皮細胞 人 結腸腺癌 McCoy's 5A, 10% 胎牛血清 
HUVEC 內皮細胞 人 臍帶 F-12K, 10% 胎牛血清 和 肝素鹽 100 ug/ ml 
I-10 上皮細胞 小鼠 睪丸癌 F-10, 15% 馬血清和 2.5% 胎牛血清 
IM-9 成淋巴細胞 人 骨髓瘤病人骨髓 RPMI-1640, 10% 胎牛血清 
JEG-2 上皮細胞 人 絨毛膜癌 MEM, 10% 胎牛血清 
Jensen 成纖維細胞 大鼠 肉瘤 McCoy's 5A, 5% 胎牛血清 
Jurkat 成淋巴細胞 人 淋巴瘤 RPMI-1640, 10% 胎牛血清 
K-562 成淋巴細胞 人 骨髓性的白血病 RPMI-1640, 10% 胎牛血清 
KB 上皮細胞 人 口腔癌 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
KG-1 骨髓白細胞 人 紅白血病病人骨髓 IMDM, 20% 胎牛血清 
L2 上皮細胞 大鼠 肺 F-12K, 10%胎牛血清 
L6 大鼠 骨骼肌成肌細胞 DMEM, 10% 胎牛血清 
LLC-WRC 256 上皮細胞 大鼠 癌 Medium 199, 5% 馬血清 
McCoy 成纖維細胞 小鼠 未知 MEM, 10% 胎牛血清 
MCF7 上皮細胞 人 乳腺癌 MEM, 10% 胎牛血清 NEAA, 10ug/ml 胰島素 
WEHI-3b 類巨噬細胞 小鼠 骨髓單核細胞白血病 DMEM, 10% 胎牛血清 
WI-38 上皮細胞 人 胚胎肺 BME, 10% 胎牛血清 
WISH 上皮細胞 人 羊膜 BME, 10% 胎牛血清 
WS1 人 胚胎皮膚 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
XC 上皮細胞 大鼠 肉瘤 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
Y-1 上皮細胞 小鼠 腎上腺瘤 F-10, 15% 馬血清和 2.5% 胎牛血清 


2、為什么要熱滅活血清
   加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學研究、培養ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。 


3、L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎?它在溶液中不穩定嗎? 
   L-谷氨酰胺在細胞培養時是重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經過一段時間后會降解,但是確切的降解率一直沒有最終確定。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性。

 
4、GlutaMAX-I是什么?培養細胞如何利用GlutaMAX-I?這個二肽有多穩定?
 
   GlutaMAX-I二肽是L-谷氨酰胺的衍生物,將其不穩定的α-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩定,即使在121磅滅菌20分鐘,GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解,如果在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎完全降解。 

5、為什么培養基中可以省去加酚紅? 
   酚紅在培養基中被用來作為PH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用(特別是雌激素)。為避免固醇類反應,培養細胞,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加有酚紅的培養基。

 
6、如何用臺盼蘭計數活細胞? 
   用無血清培養基把細胞懸液稀釋到200-2000個/毫升,在0.1毫升的細胞中加入0.1毫升的0.4%的臺盼蘭溶液。輕輕混勻,數分鐘后,用血球計數板計數細胞。活細胞排斥臺盼蘭,因而染成藍色的細胞是死細胞。

 
7、如何消除組織培養的污染?
   當重要的培養污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。


8、培養基中丙酮酸鈉的作用是什么? 
   丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源。盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是,如果沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉。

 
9、為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉淀? 
   GIBICO的胎牛血清 沒有預老化,儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在-20℃儲存胎牛血清,避免反復凍融。 

10、Hank’s 平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用,不需要CO2培養箱。原因是什么?Hank’s 平衡鹽溶液(HBS)和Earle’s平衡鹽溶液(EBS)有什么本質的功能差別? 
   HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,碳酸氫鈉的含量在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中,溶液會變堿,Hanks液在CO2培養箱中會變酸。如果希望在CO2培養箱中保存組織,需要用Eagles液。如果僅僅是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織,用Hanks液就可以了。

 
11、Qualified和 Certified 胎牛血清有什么差別?
   Certified 胎牛血清包括了Qualified 胎牛血清執行的所有的標準檢驗程序,而且除了這些標準檢測,Certified胎牛血清還有如下一些附加的檢測:
End-Point Determination of Endotoxin Content
噬菌體檢驗
生物化學檢測 
激素的檢測
血紅蛋白檢測

 
 

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